二硫苏糖醇（DTT）

C4H10O2S2   154.25

【CAS：3483-12-3】

DTT的作用机制
DTT通过硫醇-二硫键交换反应发挥作用。它含有两个巯基，能够向蛋白质中的二硫键提供电子，将其还原为游离的巯基。这个还原过程通常涉及两个连续的反应：

1. DTT与目标二硫键之间形成混合二硫键中间体。

2. DTT发生分子内环化，形成一个稳定的六元环，并释放出已被还原的蛋白质。
        DTT作为还原剂的效能具有pH依赖性，在pH值高于7时观察到最佳活性。这是因为硫醇盐阴离子在较高pH水平下占主导，它是巯基的反应形式。

DTT在蛋白质化学中的关键应用
DTT在蛋白质化学中不可或缺，其主要应用包括：

• 蛋白质电泳变性：在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，使用DTT还原二硫键，确保蛋白质充分变性，并能根据其分子量进行分离。

• 保持酶活性：通过维持半胱氨酸残基处于还原状态，DTT有助于保护对氧化敏感的酶的催化活性。

• 防止蛋白质聚集：DTT可防止形成二硫键连接的聚集体，这对于蛋白质纯化和储存至关重要。

• RNA分离：DTT用于通过还原其分子内的二硫键来灭活核糖核酸酶，从而在提取过程中保护RNA的完整性。

比较：DTT与其他还原剂
选择还原剂时，需考虑其还原强度、稳定性和挥发性等因素。

• DTT 对比 β-巯基乙醇：两种试剂均能有效还原二硫键。然而，通常更倾向于使用DTT，因为它具有更强的还原能力、更低的挥发性，因此相较于BME气味更小。此外，DTT的环状二硫化物形式提供了更稳定的还原环境。

• DTT 对比 三（2-羧乙基）膦：TCEP是一种更稳定的还原剂，在更宽的pH范围（包括DTT效果较差的酸性条件）内均有效。但TCEP分子体积较大，在还原折叠蛋白质中的胱氨酸时可能比DTT更慢。

储存、处理和安全注意事项
正确储存和处理DTT对于保持其还原效能至关重要：

• 储存：将DTT粉末置于干燥环境中，在-20°C下储存。DTT水溶液易被氧化，应在使用前即时配制新鲜溶液。

• 处理：在配制和使用过程中，尽量减少与空气和光的接触。使用适当的个人防护装备，包括手套和护目镜，以防止皮肤和眼睛受到刺激。

• 安全：DTT接触皮肤或眼睛会引起刺激，摄入或吸入可能有害。确保在通风良好的区域进行操作，并遵守所有相关的安全规程。